在生物醫(yī)藥研究中，總有一些“金貴"的樣品：

這時候，傳統(tǒng)WB往往會給你一個“靈魂拷問"：“樣品量不夠，沒法做。"

傳統(tǒng)WB在微量樣品面前，有三大“勸退"理由：

結(jié)果就是：要么放棄實驗，要么犧牲動物重復(fù)采樣，耗時耗力還心疼。

02.  Digital WB（JESS）：為微量樣品而生

JESS 是一款基于毛細(xì)管電泳的全自動蛋白質(zhì)定量檢測系統(tǒng)。它把傳統(tǒng)WB的所有步驟 —— 跑膠、轉(zhuǎn)膜、雜交、檢測、分析 —— 全部塞進(jìn)一根毛細(xì)管里自動完成。

關(guān)鍵是：它特別“省吃儉用"。

一句話總結(jié)：別人吃一碗飯才飽，JESS吃一口就夠了。

03.  JESS如何破解微量樣品檢測難點？

案例1：1000個骨髓干細(xì)胞 → 檢出GAPDH

•  樣本來源：轉(zhuǎn)基因小鼠流式分選的骨髓干細(xì)胞

•  樣品量：約1000個細(xì)胞

•  檢測結(jié)果：成功檢測到整合素β2（integrin β2）及內(nèi)參GAPDH的清晰信號，證實β2缺失會顯著影響粒細(xì)胞/巨噬細(xì)胞祖細(xì)胞的增殖能力

傳統(tǒng)WB：需要數(shù)萬個細(xì)胞，需犧牲數(shù)十只小鼠。

JESS：一只小鼠就夠了，費用只有傳統(tǒng)方法的幾十分之一。

* 文獻(xiàn)來源：The impact of integrin β2 on granulocyte/macrophage progenitor proliferation. STEM CELLS. 2018

案例2：0.5μg外泌體總蛋白 → 成功檢測

•  樣本來源：TNF-α預(yù)刺激的牙齦間充質(zhì)干細(xì)胞來源外泌體（TG-exo）

•  樣品量：約0.5μg總蛋白（上樣濃度約0.1μg/μL）

•  檢測結(jié)果：（TG-exo）用于視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷治療，證實其通過 MEG3/miR-21a-5p/PDCD4 軸發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用

傳統(tǒng)WB：外泌體蛋白量極低，常規(guī)方法難以檢出。

JESS：微量外泌體樣本也能穩(wěn)定檢測出內(nèi)參和目的蛋白兩個條帶。

附：外泌體團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)收錄“全自動數(shù)字化WB法"

2024年發(fā)布的《干細(xì)胞外泌體載藥技術(shù)規(guī)范》團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)中，全自動數(shù)字化Western Blot法（JESS）被正式列為外泌體蛋白質(zhì)標(biāo)志物檢測的推薦方法（見第6.1.3條及附錄D），標(biāo)志著該技術(shù)已獲得行業(yè)認(rèn)可。

案例3：臨床心衰患者心肌活檢 → 稀缺臨床樣本

•  樣本來源：心衰病人心肌內(nèi)膜活檢樣本

•  樣品量：臨床穿刺樣本，極其有限

•  檢測結(jié)果：成功檢測到與硝化應(yīng)激相關(guān)的多種蛋白表達(dá)變化

傳統(tǒng)WB：臨床活檢樣本量太少，難以滿足傳統(tǒng)WB需求。

JESS：已有多項臨床試驗采用JESS進(jìn)行稀缺樣本分析。

* 文獻(xiàn)來源：Nitrosative stress drives heart failure with preserved ejection fraction. Nature

案例4：132個2-cell胚胎 → 同時檢測3個靶蛋白

•  樣本來源：小鼠2-cell胚胎

•  樣品量：132個胚胎（7μL裂解物）

•  檢測內(nèi)容：成功檢測到H3K4me3、H3K27me3及內(nèi)參Histone H3三個靶蛋白。證實這三個靶蛋白在合子基因組激活過程中發(fā)揮關(guān)鍵調(diào)控作用

傳統(tǒng)WB：胚胎樣本極其珍貴，傳統(tǒng)方法根本無法檢測。

JESS：一百多個胚胎就能同時檢測多個靶點。

* 文獻(xiàn)來源：Broad histone H3K4me3 domains in mouse oocytes modulate maternal-to-zygotic-transition. Nature

案例5：0.1μg膜蛋白 → 信號清晰

•  樣本來源：干燥癥模型中的細(xì)胞膜緊密連接蛋白claudin-5

•  樣品量：約0.1μg總蛋白

•  檢測結(jié)果：成功檢測到claudin-5蛋白表達(dá)的下調(diào)。證實內(nèi)皮屏障功能破壞與干燥綜合征患者唾液腺的分泌功能減退及淋巴細(xì)胞浸潤密切相關(guān)

傳統(tǒng)WB：膜蛋白豐度低，常規(guī)檢測困難。

JESS：低至0.1μg仍可獲得清晰信號。

04.  JESS為什么能“吃這么少，干這么多"？

背后是幾項硬核技術(shù)：

一句話總結(jié) —— JESS把每一微升樣品都用到了。

05.  哪些場景適合用JESS？

06.  樣品少不是問題，找對方法就行

•  干細(xì)胞、流式分選細(xì)胞

•  外泌體、穿刺活檢樣本

•  胚胎、原代細(xì)胞、稀有細(xì)胞群

上海昊擴科技實驗室已正式引入 ProteinSimple JESS 全自動 Digital CE-Western 系統(tǒng)，提供：

•  全流程自動化檢測服務(wù)（無需人工制膠、轉(zhuǎn)膜、顯影）

•  僅需 3~5 μL 樣品，低可檢測 1000個細(xì)胞

•  支持 外泌體、活檢樣本、神經(jīng)細(xì)胞等稀缺樣品

•  自動數(shù)據(jù)分析，結(jié)果重復(fù)性高、不受人為干擾

•  預(yù)實驗 + 正式實驗

•  一個泳道一個靶點，清晰、可重復(fù)、可發(fā)表

“您來，我就能檢。"—— 讓每一份微量樣本，都能發(fā)出可靠的信號。